新一代碱基编辑器问世
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研究团队首先改造了人源尿嘧啶糖基化酶(UNG)的两个突变体,获得了两种高活性的DNA糖基化酶,分别作用于胞嘧啶碱基的CDG4和胸腺嘧啶碱基的TDG3。随后,研究团队将这两种DNA糖基化酶与nCas9(Cas9,D10A)融合,构建了CDG4-nCas9和TDG3-nCas9两种碱基编辑器,用于在大肠杆菌中进行C-to-A和T-to-A的编辑。实验结果显示,这两种碱基编辑器在大肠杆菌中的编辑效率最高分别达到58.7%和54.3%。
研究团队针对Homo sapiens密码子优化版本的CDG4-nCas9和TDG3-nCas9,在HEK293T细胞中实现了C-to-G和T-to-G的颠换编辑,编辑效率分别达到38.8%和48.7%。这两种编辑器的脱靶效果低于常用的胞嘧啶碱基编辑器(BE4max)和糖基化酶碱基编辑器(CGBEs)。研究团队将这两个编辑器命名为DAF-CBE和DAF-TBE,在优化后成功实现了人诱导多功能干细胞(hiPSC)高效编辑。
与现有的引导编辑器或糖基化酶碱基编辑器相比,DAF-BEs具有相当的编辑效率、更小的尺寸和更低的脱靶率,扩展了碱基编辑器的编辑类型,为工业菌株铸造和生物医药等领域相关研究提供了新的技术工具。